1  范围

本标准规定了动植物油脂茴香胺值的测定方法。

本标准适用于动植物油脂中醛类（主要指α，β－不饱和醛）含量的测定。

2  规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，随后所有的修改单或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T 5524  动植物油脂 扦样(ISO 5555:2001，IDT)

GB/T 6682  分析实验室用水规格和试验方法(ISO 3696:1987，MOD)

GB/T 15687  油脂试样制备(ISO 661:2003，IDT）

3  术语和定义

下列术语和定义适用于本标准。

3.1  茴香胺值 anisidine value

在规定实验条件下，p-茴香胺与试样反应，用10mm比色皿于350nm波长下测得的吸光度的增加值，扩大100倍后的数值。

注：茴香胺值没有单位，而是以1g油脂与100mL异辛烷及茴香胺的醋酸溶液反应测得的值为1个计量单位。

4  原理

试样用异辛烷（2,2,4-三甲基戊烷）溶解，与p-茴香胺的醋酸溶液反应，测定350nm波长时增加的吸光度，计算茴香胺值。

5  试剂

除非另有说明，本标准所用试剂均为分析纯。实验用水应符合GB/T 6682中三级水要求。

5.1  无水硫酸钠(Na₂SO₄)。

5.2  异辛烷(2,2,4-三甲基戊烷)：在300nm到380nm波长范围内，以水为参照测得的吸光度为零。

5.3  P-茴香胺(4-茴香醚)，无水，无色结晶。

警告：P-茴香胺有毒，应避免与皮肤接触。

将P-茴香胺装入棕色瓶中,并在0℃～4℃下暗处储藏。所存物质应无色（灰色或粉色）。如出现变色现象，按下述方法对P-茴香胺进行精制。

将4gP-茴香胺溶解于75℃、100mL的蒸馏水中，加入0.5g亚硫酸钠和2g活性炭，搅拌5min，并用中速滤纸过滤，得到清亮滤液。将滤液冷却到0℃，并在此温度下保持至少4h。最好在真空状态下滤出结晶，并用少量0℃蒸馏水洗涤。在真空干燥器中干燥。

5.4  冰醋酸:水分含量不大于0.1%（m/m）。

5.5  茴香胺试剂：考虑到茴香胺的毒性和不稳定性，制备当天分析所需的最小试剂量。例如，可按下列方法准备50mL试剂：准确称取0.125g P-茴香胺置于50mL容量瓶中，并用冰醋酸稀释至刻度。避免强光直射。

使用之前，用异辛烷作空白对照检查吸光度。如果吸光度上升到0.2以上则该试剂不能使用。在任何情况下，试剂仅供当天使用。

6  仪器

实验室常规仪器，尤其是下列仪器：

6.1  分光光度计：适合在350nm波长范围使用，带有10mm比色皿。

使用双光束分光光度计时，建议使用一对匹配的10mm比色皿。

6.2  容量瓶：25mL。

6.3  具塞试管：10mL。

6.4  移液管：1mL和5mL。

7  扦样

扦样不是本标准规定的内容，推荐采用GB/T 5524。

实验室收到的样品应具有代表性，在运输或储存过程中不得受损或变质。

8  试样的制备

按GB/T 15678制备试样。

如果试样的水分含量大于0.1%（m/m），使用下列方法进行干燥。

按每10g加1g～2g的比例加入无水硫酸钠，并充分混合样品。如果试样是固体脂肪，熔化温度不高于熔点的10℃。充分搅拌并过滤，保持该温度以防止凝固。因为水的存在会影响反应平衡，故在试样制备中应去除高出0.1%的水分。

9  操作步骤

9.1  测试溶液的制备

称取适量的试样，精确到1mg，直接装入25mL容量瓶中。预先加热固体试样至其熔点以上，但不超过熔点的10℃。用5mL～10mL的异辛烷（5.2）溶解，并用相同的溶剂稀释至刻度。

注：取样量由试样的性质和所用的分光光度计决定。取样量一般为0.4g～4g，而不能使试样的吸光度在仪器读数的上限和下限。

9.2  未反应溶液的测定

用移液管（6.4）吸取5mL测试溶液（9.1）于具塞试管（6.3）中,用移液管（6.4）加1mL冰醋酸（5.4）溶液，盖上塞子并充分摇动。在23℃±3℃下放置暗处8min。

在2min内将溶液转移到干净、干燥的分光光度计的比色皿中。从添加冰醋酸溶液计时，反应时间总计10min±1min，随即按9.5测定吸光度。

9.3  反应溶液的测定

用移液管（6.4）吸取5mL测试溶液（9.1）于具塞试管（6.3）中，用移液管（6.4）加1mL茴香胺试剂（5.5），盖上塞子并充分摇动。在23℃±3℃下放置暗处8min。

在2min内将溶液转移到干净、干燥的分光光度计的比色皿中。从添加茴香胺试剂计时，反应时间总计10min±1min，随即按9.5测定吸光度。

9.4  空白溶液的测定

用移液管（6.4）吸取5mL异辛烷（5.2）于具塞试管（6.3）中，用移液管（6.4）加1mL茴香胺试剂（5.5），盖上塞子并充分摇动。在23℃±3℃下放置暗处8min。

在2min内将溶液转移到干净、干燥的分光光度计比色皿中。从添加茴香胺试剂计时，反应时间总计10min±1min，随即按9.5测定吸光度。

9.5  用分光光度计测定吸光度

用异辛烷（5.2）在350nm处校正分光光度计零点。以异辛烷为对照，测定下列溶液吸光度：

——A₁：反应溶液（9.3）；

——A₀：未反应溶液（9.2）；

——A₂：空白溶液（9.4）。

9.6  吸光度范围

如果测定反应溶液A₁的吸光度不在0.2至0.8之间,需调整试样的取样量重新测定。

如果测定空白溶液A₂的吸光度超过0.2,需精制p-茴香胺,制备新鲜的茴香胺试剂，并用新鲜的茴香胺试剂重新测定。

10  结果表示

10.1  茴香胺值

按式（1）计算茴香胺值（AV）：

式中：

V——溶解试样的体积，单位为毫升（mL，V=25mL）;

m——样品的质量，单位为克（g）；

Q——根据茴香胺值定义，Q为测定溶液中样品浓度，单位为克每毫升（g/mL,Q=0.01g/mL)；

A₀——未反应测试溶液吸光度（9.2）；

A₁——反应溶液吸光度（9.3）；

A₂——空白溶液吸光度（9.4）；

1.2——用1mL茴香胺试剂或冰醋酸溶液稀释测试溶液的校正因子。

结果保留一位小数。

10.2  总氧化值

总氧化值有助于评价一种油脂的氧化变质。按式（2）计算总氧化值（TV）。

式中:

PV——样品的过氧化值，单位为毫克当量每千克(meq/kg)；

AV——样品的茴香胺值。

11  精密度

11.1  实验室间测试结果

附录A汇总了本方法精密度的实验室间测试情况。这些测试结果可能不适用于其它范围和测试对象。

11.2  重复性

在同一实验室，由同一操作者使用相同设备，按相同的测试方法，并在短时间内对同一被测对象相互独立进行测试获得的两次独立测试结果的绝对差值大于表1中所给的重复性限值（r）的情况不超过5%。

11.3  再现性

在不同的实验室，由不同的操作者使用不同的设备，按相同的测试方法，对同一被测对象相互独立进行测试获得的两次独立测试结果的绝对差值大于表1中所给的再现性限值（R）的情况不超过5%。

12  试验报告

试验报告应说明：

——样品所有相关信息；

——若已知采样方法，则注明；

——本标准所引用的标准方法及文献；

——本标准中没有具体说明的、或者选择的，以及所有可能影响结果的操作细节；

——测试结果；

­——如果进行了重复性试验，提供最后所得结果。

附录A

（资料性附录）

实验室间测试结果

A.1  实验室间测定

法国ITERG在2004年完成了最近的国际水平的实验室间的测试比对，9个国家（阿根廷、加拿大、法国、德国、匈牙利、荷兰、葡萄牙、英国、美国）18个实验室参加这次测试，一个样品进行两次测定，统计结果（根据ISO5725—2统计计算）列于表A.1。