1　范围

本标准详述了对同一试样连续测定1-单甘酯及甘油含量的方法。

本标准适用于动植物油脂及油、脂肪、脂肪酸、甘油等相互酯化的产品。

本标准不适合除单甘酯和甘油外，还含有两个或更多个相邻羟基的可溶于氯仿的多羟基物；含有两个或更多个相邻羟基的可溶于水的多羟基物。

2　规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T 5524  植物油脂检验扦样、分样法(ISO5555，IDT)

3　原理

将样品溶于氯仿中。用醋酸从溶液中萃取游离甘油，用过量的高碘酸醋酸溶液氧化1-单甘酯，然后加入碘化钾，并用硫代硫酸钠标准溶液滴定过量的高碘酸。

用过量的高碘酸溶液氧化甘油，然后加入碘化钾，并用硫代硫酸钠标准溶液滴定过量的高碘酸。

4　试剂

所有试剂均为分析纯。使用的水为蒸馏水或者至少相同纯度的水。

4.1　氯仿。

4.2　乙酸，5%（V/V）溶液。

4.3　高碘酸溶液：称2.7g高碘酸（H₅IO₆）置于1L容量瓶中，加入50mL水溶解，并用冰乙酸稀释到刻度，充分混合，避光贮存。

4.4　碘化钾溶液：150g/L溶液，不含碘或碘酸盐。

4.5　硫代硫酸钠标准溶液，(Na₂S₂O₃）为0.1mol/L。

4.6　淀粉，指示剂溶液，10g/L：将1g可溶性淀粉溶于100mL水中，搅拌并加热，加入0.1g水杨酸防腐剂，煮沸3min，冷却到室温。

5　仪器

常用仪器

5.1　锥形瓶，规格500mL，具磨口塞。

5.2　搅拌器或振荡器。

6　扦样

GB/T 5524植物油脂检验扦样、分样法。

7　操作步骤

7.1　样品的制备

7.1.1　片状或粉末状固体样品，在不超过熔点温度下充分混和样品。

7.1.2　其他固体或半固体样品，在不超过熔点10℃的温度下把它熔化，并充分混合。

注意：样品不能用过高温度熔化。因为样品在80℃以上时，引起酯化反应单甘酯含量可能减少。

7.1.3　液体试样，充分混合。

7.2　称样

按表1中给出的值，在50mL烧杯中准确称取适当质量的样品。

注：如果1-单甘酯含量和甘油含量差别很大，则不能用同一样品测定，必须取两份样品，分别对1-单甘酯含量和甘油含量进行测定。

7.3　 萃取

7.3.1　取3支250mL分液漏斗，并分别贴上1、2和3标签。用漏斗1收集分离的水相，漏斗2、3收集洗涤溶液。操作过程需要剧烈振摇约1min，可通过旋塞释放压力，并避免乳化。

取2支100mL容量瓶，分别贴上A、B标签。用容量瓶A盛含有1-单甘酯的氯仿溶液；容量瓶B盛含有甘油的水溶液。

7.3.2　用氯仿溶解试样，并将溶液倒入分液漏斗1中。用少量的氯仿洗涤烧杯并转移到分液漏斗中，直到体积达到45mL～50mL。

7.3.3　用25mL醋酸溶液冲洗烧杯，直到溶液不含甘油，并将冲洗液转移到分液漏斗1中。塞紧旋塞，摇动，静置1h～3h，直到分离。转移氯仿层（下层）到分液漏斗2中。

用25mL醋酸溶液冲洗烧杯，并将冲洗液转移到分液漏斗2中。塞紧旋塞，摇动，静置直到分离。转移氯仿层到分液漏斗3中，水溶液转移到分液漏斗1中。

7.3.4　用25mL醋酸溶液进一步冲洗烧杯，并将冲洗液转移到分液漏斗2，塞紧旋塞，摇动，静置直到分离。氯仿层转移到分液漏斗3中，水相转移到分液漏斗1中。将漏斗3中的氯仿层转移到容量瓶A中。

连续用20mL体积的氯仿冲洗漏斗2和漏斗3中的溶液，并将氯仿层溶液转移到漏斗3中。塞紧旋塞，摇动，静置直到分离。

7.3.5　将氯仿层转移到容量瓶A中，并稀释到刻度。塞紧并混合。

7.3.6　将水相溶液转移到容量瓶B中。用醋酸溶液洗涤漏斗1，将洗涤液转移到容量瓶B中，并稀释溶液到刻度，塞紧并混合。

7.4　1-单甘酯含量的测定

用移液管将50mL氯仿层溶液从容量瓶A中转移到锥形瓶中，用移液管加入50mL的高碘酸溶液，混合并塞紧。在黑暗处放置30min。在相同条件下，用50mL的氯仿试剂和50mL的高碘酸溶液进行空白试验。30min后，加入20mL的碘化钾溶液于样品和空白试样中。塞紧锥形瓶，混合均匀，静置1min。分别加入100mL的蒸馏水。用硫代硫酸钠标准溶液进行滴定，同时不停地摇动，以保证充分混合。接近滴定终点时，加入2mL淀粉指示剂溶液，然后一滴一滴继续滴定，并剧烈摇动，直到到达终点为止。剧烈摇动是为了保证碘从氯仿溶液中释放出来。

用于滴定样品所用的毫升数不应少于滴定空白试样所需的毫升数的80%。若不能满足此条件，则须减少样品的用量或用更少的氯仿溶液重新测定（确保高碘酸适当的过量）。

7.5　游离甘油含量的测定

过滤容量瓶B中的水相。用移液管从容量瓶B中将50mL溶液转移到锥形瓶中，用移液管加入50mL的高碘酸溶液，混匀并塞紧。在黑暗处静置30min。在相同条件下，用50mL的醋酸溶液和50mL的高碘酸溶液进行空白试验。30min后，加入20mL的碘化钾溶液于样品和空白试样中。塞紧锥形瓶，混合均匀，静置1min。分别加入100mL的蒸馏水。加入2mL淀粉指示剂溶液用硫代硫酸钠标准溶液进行滴定，直到深色刚好消失为止。

用于滴定样品所用的毫升数不应少于滴定空白试样所需的毫升数的80%。若不能满足此条件，则须减少样品的用量或用更少的水溶液重新测定（确保高碘酸适当的过量）。

7.6　同一样品测定两次

8　结果计算

8.1　计算方法和保留位数

8.1.1　1-单甘酯含量的计算

1-单甘酯含量按式（1）计算：

式中：

X——1-单甘酯的含量，（%）；

V₀——滴定空白溶液所消耗硫代硫酸钠标准溶液的毫升数，单位为毫升（mL）；

V₁——滴定样品溶液所消耗硫代硫酸钠标准溶液的毫升数，单位为毫升（mL）；

c——硫代硫酸钠标准溶液的浓度，单位为摩尔每升（mol/L）；

M_r——特定的1-单甘酯相对分子质量，根据脂肪酸组成选择（常用一种单甘酯表示，为358.54）；

m——样品的质量，单位为克（g）；

r——氯仿相容积（100mL）与用于测定的体积(50mL或更少)比，单位为毫升每毫升(mL/mL)。

结果保留一位小数。

8.1.2　甘油含量的计算

甘油含量按式（2）计算：

式中：

X₁——甘油含量，（%）；

V₂——滴定空白溶液所消耗的硫代硫酸钠标准溶液的毫升数，单位为毫升（mL）；

V₃——滴定样品溶液所消耗的硫代硫酸钠标准溶液的毫升数，单位为毫升（mL）；

c——硫代硫酸钠标准溶液的浓度，单位为摩尔每升（mol/L）；

M_r——甘油的相对分子质量（为92.1）；

m——样品的质量，单位为克（g）；

r——水相容积（100mL）与用于测定的体积(50mL或更少)比，单位为毫升每毫升(mL/mL)。

结果保留一位小数。

9　重复性

相同条件下对同一样品同时或连续进行的两次测定结果不超过9.1和9.2的规定。

9.1　1-单甘酯

含量在15%～25%时，不超过0.5%（m/m）；含量在25%～50%时，不超过2%（m/m）；含量在50%以上时，不超过1%（m/m）。

9.2　甘油

不超过0.1%(m/m)。

10　试验报告

试验报告应给出所用的方法、测定结果，本标准中未指定或自选的操作细节，以及可能影响结果的任何事件的细节。

试验报告包括所有完成这个样品测试的信息。